Diabetologia：激活但功能受损的心灵Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次不止现口内自身HIV到不止现1改进型心血管疾病针灸病征的的发展百余人在成人时期就有不太好的描述，多个口内自身HIV中性的成人中所有70%在血清转换后10将近患上心血管疾病，而随访15年的成人这一比率减低到84%。远比之下，占针灸1改进型心血管疾病一半以上的改进型1改进型心血管疾病的得病机制还未获得充分的研究成果。

更为多的人开始用作应于系统对来定义1改进型心血管疾病的的发展：形态在不止现多种口内自身HIV时进到第1阶段，不止现血糖异常时进到第2阶段，不止现病征时进到第3阶段。一些多发口内自身HIV中性的形态，在1期和2期，的发展较慢，并发展为得病的1改进型心血管疾病。我们以前描述了一分组在首次验证到多种口内自身HIV抽样后有数10年无心血管疾病的短时间段的发展者，这分组高血压人数少，但理论上特征非常明确。随后，我们发现口内自身蛋白特异性CD8+T蛋白反应在的发展很慢的高血压中所理论上不共存，但在现阶段得病和经常性共存的心血管疾病高血压中所很容易验证到。这可能指不止，与的发展高血压远比，这些高血压自身免疫反应的调节提高。

早期研究成果指不止，尽管调节性T蛋白(Treg)数量正常，但心血管疾病高血压共存一些功能性缺陷，其中所包括对IL-2的反应意志力减小。此外，心血管疾病高血压中所的effectCD4+T蛋白可能对调节更具抵抗性，表现为effectT蛋白的诱导减弱，大自然产生的Treg和本体外产生的诱导Treg，以及蛋白历程的CD4+T蛋白中所IL-2反应减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在领头极很慢的发展者中所的理论上特征，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的垂直研究成果，在21岁以下确诊的高血压亲属中所检查1改进型心血管疾病的危险因素。我们以前描述了经常性很慢的发展者的理论上特征，他们保持稳定多重口内自身HIV中性高达10年，但未不止现心血管疾病的针灸病征，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无心血管疾病并希望缺少大量血液循环抽样的很慢的发展者纳入T和B蛋白功能性量化。在目前的研究成果中所，8名慢的发展者(SP分组)，中所位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身HIV中性。所有的自发性都处于1改进型心血管疾病的发展的1期，尽管一些人随后耗尽了口内自身HIV对某些蛋白的橘红色，然而，一名高血压已经处于2期有数6年，但未不止现针灸病征，一名高血压被确诊为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中所对该NADPH完成了单独评核。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，运用于多参数流式蛋白绝技和T蛋白诱导试验评核NADPH中所Treg的基频、表改进型和功能性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)完成无指派聚类量化，评核Treg表改进型。

结果：与身本体健康NADPH远比，来自慢的发展本体的遗忘CD4+T蛋白的指派聚类推测，激活的遗忘CD4+ Treg基频减低，与阿托品诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读减低有关。一名HbA1c增高的高血压与的发展很慢者和归一化的对照分组远比，Treg曲谱有所不同。功能性量化指不止，与身本体健康NADPH远比，来自很慢的发展本体的Treg介导的CD4+effectT蛋白诱导明显受损。表现为对effectCD4+T蛋白CD25和CD134解读的诱导减低。

绘不止1 深入的表改进型量化推测，CD4+Treg亚改进型在慢的发展字段中所减低。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据上面物解读断定不止10个元簇:遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个不同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个链表推选一个集群(100个集群)，更多的元集群(10个元集群)在链表分组周围上色。每个链表中所的饼绘不止指不止单个上面的解读级别。(b)每个元聚类的热绘不止，以推测整本体上面解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)降解绘不止，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)远比丰度为每个metacluster箱直通绘不止(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白(l)。绿色白点推选理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘不止形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘不止2 用作CITRUS的预测模改进型证实，Treg基频的减低是的发展很慢的标记。分级奈斯(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP自发性和归一化的HD自发性在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的推选性绘不止。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读完成分离，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(杂色)分组以及NADPHSP 606(绿色)中所CD25+ cd127的基频汇总绘不止。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱直通绘不止;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头值得注意的簇被识别为SP和HD字段之间的不同。(j)箱直通绘不止推测了在SP(杂色)和HD(灰点)分组中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的远比丰度(比率)。(k)直方绘不止推测每个簇的表改进型(粉红色)和Treg上面远比解读与背景解读(红色);上列，寄存器Treg_3;下面动身，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇中所上面的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘不止3 与身本体健康献血者远比，的发展很慢者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T蛋白元簇(遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个解读上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的解读热绘不止(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR解读串联，推测直方绘不止(c)和汇总绘不止(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADPH包括，p< 0.05(红色)NADPHSP 606和归一化的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)串联，推测直方绘不止(e)和汇总绘不止(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘不止4 来自很慢的发展的CD4+ treg蛋白控制effectCD4+T蛋白的意志力减小。SP分组用红色的直通和白点指不止，HD分组用蓝色的直通和白点指不止，绿色的直通/白点指不止NADPHsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(应答者)被上面为CFSE, Treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白，培育不止3同一天完成流式蛋白绝技验证。(a-d)与CD4+应答者远比应的treg培育不止(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育不止。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导总和。用作中性对照(激活的响应蛋白则有treg)测算诱导总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘不止5 effectCD4+T蛋白对很慢的发展的T蛋白再造的诱导更敏感。SP分组用红色的直通和白点指不止，HD分组用蓝色的直通和白点指不止，绿色的直通/白点指不止NADPHsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上面，treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白，培育不止3同一天完成流式蛋白绝技(CD25反染)和蛋白因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培育不止。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导花红(b)。(c,d) CD25诱导花红(c)和CD134诱导花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育不止中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得不止的结论是，来自很慢的发展子的再造遗忘CD4+Treg在GITR解读中所获得了扩展和丰富，强调了全面研究成果Treg在1改进型心血管疾病危险性形态中所的差异性的必要性。

文中不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28